Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Определяют по отдельности нейтрализующие титры против всех трех типов полиовируса с использованием в качестве провокационных вирусов 100 CCID50 штаммов Sabin, в качестве индикаторных клеток - Vero или Hep2 в условиях нейтрализации, состоящих в инкубации в течение трех часов при 35-370С и 18 часов при 2-80С. Для получения результатов производят фиксацию и окрашивание после семидневной инкубации при 350С. Для признания определения достоверным необходимо показать, что титр провокационных вирусов находится в пределах от 10 до 1000 CCID50, а титр нейтрализующих антител в контрольной сыворотке должен находиться в пределах двух двукратных разведений среднего геометрического титра сыворотки. Активность вакцины вычисляют путем сопоставления количества респондеров на испытуемую вакцину и вакцину сравнения. Анализ выполняют с использованием пробит-метода или, после проверки достоверности, метода параллельных линий. В случае пробит-метода для определения респондера необходимо установить граничный титр нейтрализующих антител для каждого из типов полиовируса. В связи с изменчивостью результатов в разных лабораториях, определить общепринятые граничные значения не представляется возможным. Вместо этого граничные значения определяют в каждой лаборатории, основываясь не менее, чем на трех результатах испытаний вакцины сравнения. За граничное значение принимают среднюю точку в шкале log2 минимального и максимального значений среднего геометрического титров, вычисленных для ряда из трех или более испытаний. Для каждого из трех типов полиовируса активность вакцины не должна быть существенно ниже такой же активности препарата сравнения. Результаты испытания являются достоверными, если:
- как для испытуемой вакцины, так и для препарата сравнения, ED50 заключена в интервале между наибольшей и наименьшей дозами препарата, введенными животным,
- при статистическом анализе не выявляется отклонений от линейности и параллельности,
- границы доверительного интервала относительной активности находятся между 25% и 400% от оцененного значения активности.
2.7.22. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА XI
Активность фактора свертывания крови человека XI определяют путем сравнения количества испытуемого препарата, необходимого для уменьшения времени свертывания испытуемой смеси, содержащей вещества, отличные от фактора XI, принимающие участие в процессе коагуляции крови, и количества нормальной человеческой плазмы, которое требуется для получения такого же эффекта. 1 единица фактора XI равна активности 1 мл нормальной человеческой плазмы.
Восстанавливают по отдельности испытуемый препарат и препарат сравнения в соответствии с указаниями на этикетке и используют немедленно. В случае необходимости, определяют количество присутствующего гепарина (2.7.12) и нейтрализуют гепарин добавлением протамина сульфата R (10 мкг протамина сульфата нейтрализуют 1 МЕ гепарина). Испытуемый препарат и препарат сравнения разбавляют количеством имидазольного буферного раствора рН 7,3 R, содержащего 1% альбумина, достаточным для получения растворов с содержанием от 0,5 до 2,0 единиц в миллилитре. Готовят двукратные разведения в диапазоне от
1:10 до 1:80 с использованием имидазольного буферного раствора рН 7,3 R. Разведения производят с высокой точностью и используют немедленно.
В определении могут использоваться, например, инкубационные пробирки, температура которых поддерживается с помощью водяной бани на уровне 370С. В каждую пробирку помещают по 0,1 мл субстрата плазмы R3 и по 0,1 мл одного из разведений испытуемого препарата или препарата сравнения. К содержимому каждой пробирки добавляют по 0,1 мл подходящего разведения цефалина R или заменителя тромбоцитов R и 0,1 мл суспензии 0,5 г легкого каолина R в 100 мл раствора натрия хлорида R концентрацией 3,7 г/л. Пробирки выдерживают около 10 минут, время от времени переворачивая. К содержимому каждой пробирки добавляют по 0,1 мл раствора хлорида кальция R концентрацией 7,4 г/л. С использованием таймера измеряют время коагуляции, т.е. интервал времени между добавлением хлорида кальция и первыми признаками образования фибрина, которые можно определять либо визуально, либо с применением соответствующей аппаратуры. Вычисляют активность с использованием обычных статистических методов (например, 5.3. Статистический анализ результатов биологических испытаний и количественных определений).
Для подтверждения отсутствия в субстрате плазмы R3 существенного количества фактора XI выполняют контрольный опыт с использованием вместо испытуемого препарата соответствующего объема имидазольного буферного раствора рН 7,3 R. Результаты испытания считают достоверными, если время коагуляции в контрольном опыте составляет от 100 до 200 секунд.
# 2.7.23 ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ИНСУЛИНА
Активность испытуемого препарата инсулина определят путем сопоставления его гипогликемического (сахаропонижающего) действия с гипогликемическим действием стандартного образца инсулина.
